Contrôle de l’activité d’une Glucose-6-phosphate-déshydrogénase (G6PDH) utilisée dans un test urinaire détectant le tétrahydrocannabinol (THC) publié le 20/06/2023  - mis à jour le 29/06/2023

Présentation
Le tétrahydrocannabinol (THC) est le produit chimique responsable de la plupart des effets psychologiques du Cannabis. Son commerce et son utilisation ne sont pas légales en France (2023) et de nombreux kits de dépistage sont présents sur le marché pour identifier et/ou quantifier la présence de ce stupéfiant.

Un test urinaire de détection du THC utilise une enzyme conjuguée avec cette drogue pour qualifier sa présence. Ce test est commercialisé par Thermo scientific et sa fiche technique est intitulée "Dosage des cannabinoïdes DRI®".

Le principe de ce Kit suit la technique EMIT (Enzyme multiplied immunoassay technique). Cette technique utilise l’activité enzymatique d’une enzyme marquée à la drogue recherchée, la glucose-6-phosphate déshydrogénase (G6PDH), modulée par des anticorps dirigés contre cette drogue. L’activité enzymatique, en présence de son substrat (le glucose-6-phosphate) entraîne la conversion de la nicotine adénine dinucléotide (NAD+) en la forme réduite (NADH) et l’augmentation de l’absorbance à 340 nm est mesurée par spectrophotométrie.
L’addition de l’anticorps anti-drogue entraîne la liaison à l’enzyme conjuguée, ce qui réduit drastiquement l’activité de l’enzyme. En effet, le présence de drogue dans l’échantillon entre en compétition avec l’enzyme conjuguée en se liant à l’anticorps, ce qui permet à l’enzyme non liée de devenir active et de catalysée la réaction d’apparition du NADH et donc de faire augmenter ainsi l’absorbance à 340 nm. Par conséquent, des quantités croissantes de drogue dans l’échantillon produisent une activité enzymatique accrue et donc une augmentation de la vitesse de variation de l’absorbance à 340 nm.

Le principe peut être résumé dans le schéma suivant :

Analyse par méthodes immunologiques by Ayoub Bensakhria 3 novembre, 2017 https://www.analyticaltoxicology.com/analyse-methodes-immunologiques/

Pour le contrôle de la présence de THC dans les urines, le test DRI® test utilise une enzyme, la glucose 6-phosphate déshydrogénase bactérienne, conjugué avec du THC.
Pour ce dosage, l’enzyme marquée au THC et le THC éventuellement présent dans les urines sont en compétition avec un anticorps anti-THC introduit pour le test. L’absence de THC dans les urines, dirige l’ensemble des anticorps anti-THC vers l’enzyme ce qui bloque son activité. La présence de THC dans les urines mobilise les anticorps et libère des sites actifs de l’enzyme.

Remarque : L’utilisation de la G6PDH bactérienne, qui utilise le NAD+ comme coenzyme, évite l’interférence éventuelle de la G6PDH endogène, qui utilise le nicotine adénine dinucléotide phosphate (NADP+).