Mallette FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography) publié le 13/09/2016

6. Consignes d’utilisation de ÄTKA

Pour le bon fonctionnement de l’appareil ces consignes sont à suivre impérativement.

6.1 Traitement de la pompe

Prière de desserrer le système péristaltique de la pompe après utilisation.

6.2 Montage et démontage d’une colonne

Les colonnes peuvent facilement être installées et retirées.
Pour le montage, il convient de viser d’abord la partie basse de la colonne puis la partie haute.
Pour le démontage l’opération doit être inversée, d’abord le haut puis le bas

6.3 Démarrage avec une colonne

A chaque démarrage ou à chaque changement de colonne, il faut faire un rinçage manuel avec le solvant A pour une colonne échangeuse d’ions ou avec de l’eau distillée avec une colonne d’exclusion.
La procédure est la suivante :

• Plonger les crépines A et B dans le solvant A ou l’eau distillée
• Déconnecter le tube collecteur de fractions de son emplacement et le brancher sur le récipient poubelle. (voir le 1 sur le schéma ci-dessous)
• Allumer le chromatographe
• Ouvrir le logiciel Unicorn® (System Control) (voir 7. Utilisation unicorn)
• Sur System Control, connecter le chromatographe à Unicorn® en cliquant sur « Connect »
• Mettre la boucle en position « ‘inject »
• Lancer la méthode manuelle en cliquant sur « Manual Run »
• Choisir un débit de 4 mL/min (Pump, flow rate)
• Ouvrir les vannes (en cliquant sur le schéma présenté sur System control) pour que le solvant A ou l’eau passe par l’ensemble du système comme présenté sur ce schéma (chemin en vert).
• Laisser tourner 5 min et cliquer sur stop (voir le 2 sur le schéma ci-dessous)
• Remettre la boucle sur la position « Load » et le tube collecteur de fractions sur son emplacement d’origine.
  Remarque : pour ouvrir ou fermer une vanne, il suffit de cliquer sur la vanne sur l’écran directement. (Vanne bleu = ouvert ; vanne blanche = fermé (exemple : voir 3 sur le schéma ci-dessous))
  

6.4 Rinçage de la colonne en fin de manipulation

A l’arrêt de l’utilisation de l’appareil et pour conserver les colonnes, un rinçage du circuit est à réaliser avec de l’éthanol à 20% (colonne échangeuse d’ions et colonne d’exclusion).
Suivre la même procédure que le démarrage de la colonne.