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article Mallette FPLC (Fast Protein Liquid Chromatography)     -    publié le 13/09/2016

Extraction et purification du lysozyme du blanc d’oeuf

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• 1. Composition de la mallette FPLC

  • Un système chromatographique automatisé ÄKTA Start®
  • Un PC Acer – Windows 8.1 muni du logiciel Unicorn®
ÄKTA Start

• 2. Principe de la FPLC (Système ÄTKA Start)

Il s’agit d’une chromatographie sur colonne réalisée avec un système automatisé. Ce système utilise une pompe, réglée à un débit consigne, qui permet au solvant d’entrainer les constituants d’un mélange (protéines) sur une colonne remplie de matrice.
Ce système automatisé accepte quatre types de colonne, à savoir :

  • Des colonnes d’affinité
  • Des colonnes échangeuses d’ions (IEX)
  • Des colonnes d’interaction hydrophobe (HIC)
  • Des colonnes d’exclusion de taille (SEC).

La plupart des protocoles de purification de protéines nécessitent l’utilisation de plusieurs de ces types de procédures chromatographiques pour obtenir la pureté nécessaire pour les applications en aval. Le choix de la (les) méthode(s) chromatographique(s) la (les) plus appropriée(s) et l’ordre de ces méthodes est essentielle dans l’optimisation d’une méthode de purification des protéines.
En analysant la séquence d’une protéine, des caractéristiques uniques peuvent être identifiées qui peuvent aider à sa purification. La taille et la charge d’une protéine (à un pH spécifique) peut être déterminée, ainsi que l’identification de grandes régions de résidus hydrophobes.

Tableau de comparaison des différents types de chromatographie applicable aux protéines

- Référence :Purification de Protéine par chromatographie sur colonne

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