Dosage du CBD d'huiles commerciales et d'extraits de chanvre par méthode chromatographique. publié le 02/08/2022 - mis à jour le 07/11/2023

De nombreux cannabinoïdes sont présents dans le chanvre (Cannabis sativa) et peuvent en être extrait pour la réalisation de différents produits comme des huiles relaxantes, des infusions ou encore des confiseries.
Parmi ces cannabinoïdes, on trouve :

Le cannabidiol (CBD) auquel on attribue des vertus relaxantes, antioxydantes et anti-inflammatoire sans effet psychoactif. Ce CBD est en vente libre en France. Il est légal.
Le tétrahydrocannabinol (THC) utiliser pour la fabrication de produits stupéfiants comme de la résine de cannabis. Le THC est lui interdit à la vente libre.
Le cannabinol (CBN) présente un effet légèrement psychotrope mais beaucoup que le THC. Il provient de l’oxydation du THC et se développe lorsque, celui-ci est exposé aux rayons UV ou à l’oxygène. On lui attribue à ce CBN un léger pouvoir analgésique.
Le cannabigerol (CBG) et le cannabichromene (CBC), présents aussi dans la fleur de chanvre, possèderaient, quant à eux, des effets antibactériens, analgésique ou encore anticoagulant.

Dans le cadre d’une activité technologique de niveau BTS, on se propose de quantifier par méthode chromatographique, le CBD présent dans différents produits du commerce vendus comme contenant du CBD.

Une huile de CBD à 10%.
Des fleurs séchées de chanvre avec une quantité de CBD estimée à 5% d’après le commerçant.

Pour être quantifier en chromatographie (Chromatographie de partage HPLC). Les produits contenants du CBD doivent être traités au préalable pour en extraire ce CBD. Cette extraction aboutie à l’obtention de solutions de CBD prêtes pour l’injection.

Dans cet article, différents documents sont mis à disposition pour réaliser ces extractions et ces quantifications.

Fiche protocole 1 : Extraction des cannabinoïdes (du CBD) de la fleur de Chanvre = CBD_Chanvre

L’échantillon de bourgeon de chanvre doit être broyé en petites particules homogènes pour garantir l’extraction du maximum de cannabinoïdes.

Pesez avec précision 0,200 ± 0,005 g d’échantillon broyé dans un tube à centrifuger
Rajouter 8 ml d’éthanol dans un tube et vortexer pendant 1 min,
Placer le tube sur un agitateur horizontal pendant 30 min.
Centrifuger l’échantillon à 4000 tr/min pendant 5 min pour granuler le matériel végétal.
Verser le surnageant dans une fiole jaugée de 20 ml recouverte d’aluminium.
Garder le culot pour la deuxième extraction.
Effectuer une deuxième extraction comme précédemment sur le culot obtenu.
—> Rajouter 8 ml d’éthanol dans un tube et vortexer pendant 1 min,
—> Placer le tube sur un agitateur horizontal pendant 30 min.
—> Centrifuger l’échantillon à 4000 tr/min pendant 5 min pour granuler le matériel végétal.
Verser le nouveau surnageant obtenu dans la fiole jaugée de 20 ml contenant déjà le contenu de la première extraction.
Compléter la fiole avec de d’éthanol jusqu’au trait de jauge et bien mélanger.
Filtrer l’échantillon dans un flacon adapté à l’aide d’une seringue montée d’un filtre PTFE de 0,2 µm.
Conserver dans le flacon bouché, le filtrat obtenu = CBD_Chanvre

Si l’échantillon donne un signal trop important, effectuer la dilution suivante
Réaliser une dilution de 1/10ème de l’échantillon avec de l’éthanol.
Conserver dans des tubes bouchés les solutions obtenues = CBD_{Chanvre 1/10}

Fiche protocole 2 : Préparation d’une solution de CBD à partir d’une huile de chanvre = CBD_commercial

Première partie : Préparation d’échantillon d’huile de chanvre

Introduire 400 µL d’isopropanol dans un tube à hémolyse en verre.
Ajouter 10 µL d’échantillon d’huile de chanvre par pipetage inverse.
Boucher le tube.
Agiter pendant au moins 30 secondes pour dissoudre complètement l’huile dans isopropanol.
Ajouter 400 µL de méthanol au mélange.
Boucher et agiter de nouveau pendant 30 secondes.
Filtrer le mélange à travers une seringue avec un filtre PTFE de 0,2 µm dans un flacon HPLC.
Conserver dans un tube bouché le filtrat obtenu.

Deuxième partie : Préparation d’échantillon d’huile de chanvre pour analyse quantitative HPLC

Introduire 800 µL de méthanol dans un tube à hémolyse en verre.
Ajouter 200 µL du filtrat obtenu dans la partie 1.
Boucher et agiter pendant 30 secondes.
(Remarque : facteur de dilution total 405X (partie 1 + partie 2)).
Conserver dans un tube bouché la solution obtenue = CBD_commercial

Remarque : Le méthanol sera utilisé sur un poste spécifique

Fiche protocole 3 : Analyse quantitative de solutions de CBD par HPLC

Matériels
Unité HPLC : VANQUISH CORE Thermo

Colonne : phase inverse RP 18 [Ǿ= 4,6mm, L=150 mm] ;
Boucle d’injection : 20 µL.
Détecteur : spectrophotomètre UV

Solutions et réactifs

Phase mobile : mélange Acétonitrile/eau 80/20
Échantillon : solutions de CBD (ou autres solutions contenant des cannabinoïdes)

Technique

Programmer l’unité d’HPLC
1. Vérifier l’état de fonctionnement de l’unité d’HPLC
2. Charger la méthode « CBD »
3. Vérifier les paramètres de la méthode
—> Débit 1,5 mL/min.
—> Longueur d’onde : 228 nm.
—> Durée 9 minutes
4. Rajouter les injections à faire dans la séquence CBD (Voir tutoriel)

Réalisation de la chromatographie
1. Injecter tour à tour les différentes solutions de CBD (ou solutions contenant des cannabinoïdes) à analyser.
2. Traiter les acquisitions sur chroméléon.
3. Imprimer les résultats.

Exemples de résultats

Profils chromatographiques obtenus avec VANQUISH CORE Thermo piloté par le logiciel Chroméléon 7

Figure 1 : Profil CBD étalon Sigma

Figure 2 : Profil CBD extrait huile

Tableau des résultats

Une injection d’un étalon CBN est réalisée pour vérifier la spécificité du Tr du CBD.
Une injection d’un extrait d’isolat de CBD (CBD pur à 99,99%) est aussi réalisée pour calculer l’inexactitude relative.

Exemples de calculs : Calcul de la masse de CBD dans l’huile de commerciale